基因擴(kuò)增PCR實驗靈敏度較高，微量的外源核酸污染即可導(dǎo)致實驗結(jié)果假陽性、數(shù)據(jù)失真、實驗失敗，樣本交叉污染是PCR實驗最常見的問題之一。愛思進(jìn)PCR八連管是基因擴(kuò)增實驗的專用耗材，適配批量樣本同步擴(kuò)增實驗，其管壁薄、導(dǎo)熱均勻、密封性優(yōu)異，但實驗操作過程中若流程不規(guī)范，極易出現(xiàn)孔間交叉污染、樣本氣溶膠污染等問題。掌握標(biāo)準(zhǔn)化的防交叉污染操作技巧，可有效規(guī)避污染風(fēng)險，保障PCR實驗數(shù)據(jù)精準(zhǔn)可靠。
實驗前期耗材預(yù)處理與分區(qū)操作是防污染的基礎(chǔ)。實驗需使用全新未開封的八連管，禁止重復(fù)使用耗材，杜絕殘留核酸污染。耗材開封、試劑配制、樣本加樣、擴(kuò)增上機(jī)需嚴(yán)格分區(qū)操作，按照試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增檢測區(qū)的獨立分區(qū)流程作業(yè)，各區(qū)專用器具不交叉混用，避免跨區(qū)氣溶膠與核酸污染。操作前對實驗臺面、移液設(shè)備、槍頭盒進(jìn)行全面消殺清潔，去除環(huán)境殘留核酸，營造無污染實驗環(huán)境。
加樣操作規(guī)范是規(guī)避孔間交叉污染的核心技巧。使用八連管開展批量加樣時，需采用一次性無菌槍頭，單樣本單槍頭，禁止一槍多用、槍頭復(fù)用，避免樣本交叉沾染。加樣過程中動作輕柔平穩(wěn)，緩慢加注試劑與樣本，避免液體飛濺、管壁掛液、氣泡溢出，防止樣本氣溶膠擴(kuò)散至相鄰管孔引發(fā)交叉污染。加樣順序固定有序，避免樣本混淆、滴漏污染，加樣完成后及時蓋緊管蓋，減少管孔暴露時間，杜絕空氣中核酸落入污染樣本。
八連管密封與上機(jī)操作可有效杜絕擴(kuò)增過程污染。加樣完成后需按壓嚴(yán)實八連管蓋，保證每一個管孔密封，無松動、縫隙、虛蓋情況，避免PCR擴(kuò)增高溫過程中管內(nèi)液體蒸發(fā)、氣溶膠溢出，造成孔間串污與設(shè)備污染。上機(jī)放置八連管時輕拿輕放，保證管體貼合儀器加熱模塊，放置平穩(wěn)端正，避免移位、擠壓導(dǎo)致管蓋松動。禁止在擴(kuò)增運(yùn)行過程中開啟儀器、移動耗材，防止溫度驟變引發(fā)液體溢出、氣溶膠擴(kuò)散。
實驗后消殺與廢棄物規(guī)范處理可規(guī)避二次污染。實驗完成后及時取出八連管，密封打包廢棄耗材，集中規(guī)范處理，禁止隨意開蓋、丟棄，避免擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)散污染實驗環(huán)境。對實驗臺面、儀器模塊、移液設(shè)備進(jìn)行消殺，清除殘留擴(kuò)增核酸，杜絕殘留污染影響后續(xù)實驗。同時嚴(yán)格區(qū)分陰性、陽性樣本操作流程，優(yōu)先處理陰性樣本，最后處理陽性樣本，減少高濃度陽性核酸對低濃度樣本的污染風(fēng)險。
常態(tài)化規(guī)范操作可充分發(fā)揮愛思進(jìn)PCR八連管的耗材性能，有效規(guī)避批量基因擴(kuò)增實驗中的交叉污染問題，提升實驗重復(fù)性與準(zhǔn)確率，保障基因檢測、科研擴(kuò)增實驗的嚴(yán)謹(jǐn)性與可靠性。
